ルイージ
マリオの双子の弟で、本作の主人公。オバケが苦手ながら、オバキュームを手にマンションへ向かいます。
オヤ・マー博士
オバケを研究する博士。発明品やベースラボからの通信で、ルイージの探索を支えます。
キノピオ
博士の助手として各地で調査しています。絵画に閉じ込められたキノピオは、ダークライトで救出しましょう。救出後は一緒に仕掛けを解く場面もあります。
マンションのボス
ウーノス：ウラメ～シ屋敷で巨大グモに取り憑くボス。
ドゥーエ：ノロワ～レ大樹で待ち受けるボス。
トーレス：ジゴ～クロック工場の時計塔で戦うボス。
クアート：ヒャッキ～ヤ坑道で巨大な氷の姿を使うボス。
クークエ：オドロ～宮殿で複数の鎧に取り憑くボス。
キングテレサとマリオ
キングテレサはダークムーンを破壊したテレサの王。物語の後半では、絵画に閉じ込められたマリオを救い出すため、ルイージが最後の戦いに挑みます。